Odběrový manuál - sérologie a PCR

5. Manuál pro odběry primárních vzorků

5.1. Objednávání vyšetření

5.1.1. Požadavkové listy - žádanky

Pro objednávání vyšetření v laboratořích společnosti RNDr. Zdeněk Čecháček jsou k dispozici následující typy požadavkových listů - žádanek:

     - žádanka o laboratorní vyšetření těhotných (fialová)

     - žádanka o sérologická vyšetření a PCR (červená)

Použití jiných forem objednávání vyšetření je přípustné, pokud splňují následující kriteria:

     - je v nich zřetelně specifikováno, že vyšetření se mají provést v laboratořích RNDr. Z. Čecháček s.r.o.

     - jsou v nich vyplněny všechny povinné údaje dle následujícího článku (5.1.2.)

V případě jakýchkoliv nejasností kontaktujte pracovníky laboratoří.

5.1.2. Údaje vyplňované v žádance:

Povinné

     - kód pojišťovny pojištěnce (pacienta)

     - číslo pojištěnce - pacienta (rodné číslo, číslo pojistky u cizinců)

     - příjmení, jméno pacienta, příp. titul

     - základní a další diagnózy pacienta

     - datum a čas odběru (datum a čas přijetí vzorku laboratoří je evidován buď automaticky laboratorním        informačním systémem po přijetí žádanky, nebo záznamem přijímající osobou přímo na žádance)

     - základní identifikace objednavatele: IČZ a odbornost

     - razítko a podpis objednatele

     - kontakt na objednavatele, tj. adresa, telefon nebo jiné spojení, pokud není uveden na razítku

     - požadovaná vyšetření (vázaná k dodanému vzorku nebo k dodaným vzorkům)

     - specifikace materiálu, je-li na žádance požadována

Doplňující:

     - další údaje o pacientovi související s vyšetřením (léčba, datum prvních příznaků onemocnění apod.)

     - informace, jestli jsou vyšetření požadována u ambulantního nebo hospitalizovaného pacienta

     - věk v rocích a pohlaví pacienta v situacích, pokud nelze určit jednoznačně z čísla pojištěnce

     - objem vzorku, v případě, že je k vyšetření požadován

     - specifikace statimových vyšetření: označení žádanky nebo vyšetření nápisem „STATIM“ nebo „ST“,        (nejlépe červeně)

     - specifikace materiálu, pokud je do laboratoře zasílán sekundární vzorek.

5.1.3. Označování vzorků

Vzorky musí být označeny tak, aby během jejich příjmu v laboratořích mohly být jednoznačně identifikovány k určité žádance. Údaje na štítku vzorku musí obsahovat:

     - příjmení a jméno pacienta,

     - rodné číslo nebo datum narození nebo ročník pacienta,

     - doplňující údaj, pokud je současně posíláno do laboratoře několik odběrů jednoho pacienta současně        (datum odběru, pořadové číslo odběru apod.), potom stejný údaj musí být uveden i na žádance.

5.1.4. Ústní (telefonické) objednávání vyšetření

Ze vzorků dodaných do laboratoře lze dodatečně, např. na základě telefonického doobjednání lékařem, provádět vyšetření za dodržení těchto pravidel:

1. dodatečná vyšetření lze telefonicky doobjednat, ale budou provedena až po doručení dodatečného  požadavkového listu do laboratoře,
2. dodatečná vyšetření nebudou provedena, pokud není možné zajistit korektní dodržení podmínek pro preanalytickou fázi u analytů s určitým omezením daným jejich stabilitou v biologickém materiálu.

Vzorky séra (plazmy) jsou v laboratoři standardně uchovávány po dobu 1 měsíce, pro doobjednání resp. provedení kontrolních vyšetření. Vzorky po stanovení HIV a hepatitid jsou uchovávány po dobu 6 měsíců.

5.2. Odběrové materiály

V laboratořích RNDr. Zdeněk Čecháček je akceptován jakýkoliv odběrový materiál, který je v souladu s požadavky na odběrový materiál resp. typ vzorku pro objednávaná vyšetření. Nicméně klientům laboratoře je poskytován na vyžádání následující odběrový materiál:

5.2.1. Odběrové soupravy – srážlivá krev

1) Odběrový systém Vacutainer

Zkumavka Vacutainer serum 6 ml, 100 x 13 mm, červený uzávěr

Jehla Vacutainer 21Gx38 mm, zelená

2) Odběrový systém Sarstedt

S-Monovette 4,9 ml Z

S-Monovette 7,5 ml Z

S-Monovette 9,0 ml Z

Odběrová jehla Sarstedt

5.2.2. Odběrové soupravy – nesrážlivá krev

1) Odběrový systém Vacutainer

Zkumavka Vacutainer K2EDTA 6 ml, 100 x 13 mm, fialový uzávěr

Jehla Vacutainer 21Gx38 mm, zelená

2) Odběrový systém Sarstedt

S-Monovette 2,6 ml K3E

S-Monovette 4,9 ml K3E

Odběrová jehla Sarstedt

5.2.3. Odběrové soupravy – moč

1) Zkumavka plastová, kónická, žlutý uzávěr

Objem 10 ml, 16 x 103 mm

5.2.4. Odběrové soupravy PCR

1) Kartáček pro odběr z endocervixu – sterilní

Dodavatel: Dispolab s.r.o., kat.číslo 1644

Kartáček je určen ke stěrům z endocervixu na průkaz DNA HPV, DNA Ch.trachomatis, DNA N.gonorhoeae).

2) Kartáček pro odběr z uretry  – sterilní

Dodavatel: Dispolab s.r.o., kat.číslo 1641

Kartáček je určen k výtěrům z uretry ( muži i ženy) na průkaz DNA Ch.trachomatis,  DNA N.gonorhoeae).

3) Zkumavka plastová (červený uzávěr) – sterilní

Dodavatel: Dispolab s.r.o., kat.číslo 1198

Zkumavka sterilní , objem 5 ml. Zkumavka je součástí odběrového balíčku pro PCR, slouží k zalomení   kartáčku pro odběr z endocervixu a uretry.

4) Zkumavka plastová (žlutý uzávěr)

Dodavatel: MED-LAB trade, s.r.o., kat. číslo 700108S

Zkumavka 16 x 100 mm, objem 10 ml, sterilní s nešroubovacím uzávěrem. Souprava je určena pro moč na průkaz DNA Ch.trachomatis, N.gonorhoeae.

5.2.5. Ostatní odběrový materiál

Pokud je na provedení vyšetření zapotřebí i jiny odběrový materiál kontaktujte nás, prosím, telefonicky nebo e-mailem, jeho dodání po konzultaci s laboratoři, která vyšetření provádí zprostředkujeme.

5.3. Obecné zásady pro odběr vzorků

5.3.1. Příprava pacienta

Pro sérologická vyšetření obecně není zapotřebí žádná speciální příprava pacienta, odběr dokonce nemusí být prováděn na lačno. Nicméně s ohledem na kvalitu vzorku by se před odběrem měl pacient vyvarovat konzumace tučných jídel.

5.3.2. Zásady pro odběr vzorků žilní krve

A) Postup odběru

Odběr vzorků se provádí obvyklým způsobem podle použitého odběrového systému, a to tak, aby byl zajištěn dostatečný objem vzorku pro požadovaná vyšetření a nedošlo k znehodnocení vzorku (hemolýza apod.) – viz.: C) Chyby při odběru žilní krve.

B) Objem vzorku krve, skladování

1) Průměrná potřeba vzorku pro 1 vyšetření představuje cca 0,5 ml krve (0,2 ml séra resp. plazmy). Při menším počtu objednávaných vyšetření - < 5 je nutné připočítat rezervu cca 1 ml krve (0,5 ml séra resp. plazmy) pro technologické objemy analyzátorů resp. pro alikvotaci.

2) V případě použití zkumavek s přísadami se vždy odebírá plná zkumavka.

3) Primární vzorky se skladují při laboratorní teplotě (18 - 22ºC) po dobu maximálně 24 hodin tak, aby se zabránilo jejich rozlití, kontaminaci, přímému působení slunečního světla a zdrojů tepla.

4) Při skladování nad 24 hodin je nutné skladovat v souladu s požadavky na preanalytickou fázi objednávaných vyšetření:

a) zkumavky se separačním gelem lze skladovat v chladničce

b) v případě ostatních odběrových zkumavek je nutno přenést oddělené sérum resp. plazmu do označených zkumavek, které pak lze uchovávat v chladničce (ne však déle než 72 hodin) nebo v mrazničce.

C) Chyby při odběru žilní krve

1) Chyby při přípravě pacienta

a) Požité tuky mohou způsobit přítomnost chylomiker v séru nebo v plazmě a ovlivnit výsledky některých vyšetření, případně je zcela znemožnit.

b) Pacient nevysadil před odběrem léky, které nejsou naprosto nezbytné.

c) Pacient před odběrem dlouho nepil (možnost ovlivnění výsledků dehydratací).

2) Chyby způsobené nesprávným použitím škrtidla

a) Dlouhodobé stažení paže nebo nadměrné cvičení („pumpování") se zataženou paží

před odběrem vede ke změnám poměru tělesných tekutin v zatažené paži.

3) Chyby vedoucí k hemolýze vzorku

Hemolýza ovlivňuje většinu biochemických i hematologických vyšetření zejména proto, že řada látek uniká z rozpadlých erytrocytů do séra nebo plazmy, případně tím, že červené zbarvení séra a plazmy interferuje ve vyšetřovacím postupu. Důvody hemolýzy mohou být následující:

a) Znečištění jehly nebo pokožky stopami tekutého (nevysušeného) dezinfekčního roztoku.

b) Znečištění odběrových nádobek stopami saponátu.

c) Použití příliš úzké jehly, kterou se pak krev násilně nasává.

d) Prudké vystříknutí krve ze stříkačky do zkumavky.

e) Prudké třepání krve ve zkumavce (např. při nešetrném transportu).

f) Uskladnění plné krve v chladničce okamžitě po odběru, zmrznutí vzorku krve.

g) Neúměrné prodloužení doby mezi odběrem a separací séra nebo plazmy (dodáním vzorku do laboratoře).

h) Použití nesprávné koncentrace protisrážlivého činidla.

4) Chyby při adjustaci, skladování a transportu vzorku

a) Použití nevhodných zkumavek pro objednávaná vyšetření.

b) Použití nesprávného protisrážlivého činidla nebo jeho nesprávné koncentrace.

c) Nesprávné označení zkumavky s odebraným materiálem.

d) Potřísnění zkumavek s materiálem krví.

e) Překročení předepsané doby mezi odběrem a oddělením krevního koláče nebo erytrocytů od séra nebo plazmy.

f) Vystavení krve teplu, nebo přímému slunečnímu světlu.

5.4. Specifikace speciální preanalytické fáze pro jednotlivé laboratoře

5.4.1. Laboratoř sérologie a PCR          

A) Srážlivá krev

Odběr se provádí standardním způsobem. Nejsou žádné speciální požadavky na odběr a preanalytickou fázi.

B) Vzorky pro PCR

1) Odběr provádíme před léčbou, nebo nejméně 14 dní po jejím ukončení (průkaz DNA mrtvých bakterií může způsobit falešnou pozitivitu).

2) Zásyp z kůže, talek z rukavic a hemolyzovaná krev mohou způsobit inhibici PCR (nehodnotitelný vzorek).

3) U sliznic přirozeně pokrytých hlenem je nutno hlen odstranit tamponem (např. děložní čípek), teprve poté odebírat povrchové buňky.

4) Stěry (je vhodné udělat ze 3 různých míst sliznice), tkáňové homogenáty vytřepeme v 0.5 ml fyziologického roztoku. Materiál nesmí zaschnout na odběrovém nástroji. Po vytřepání odběrový nástroj zlikvidujeme, příp. sterilizujeme (kyreta, sonda).

5) Tekutý materiál jako sérum, plasma, plná krev (+EDTA), mozkomíšní mok, sliny, sputum, slzy atd. odebíráme do uzavíratelných zkumavek v množství cca 0.5 ml bez  fyziolog. roztoku.

6) Odběr moče se provádí optimálně z první porce ranní moče v množství cca 10ml.

7) Materiál okamžitě po odběru zaslat do laboratoře, pokud to není možné, tak skladovat v lednici 2 - 8°C maximálně 3 dny.

5.5. Transport do laboratoře

Vzorky lze do laboratoře dopravit osobně nebo prostřednictvím svozu organizovaného společností RNDr. Z. Čecháček s.r.o., případně i jinou organizací. Ve výjimečných případech lze použít poštu.

Vždy je přitom nutné dodržení podmínek pro preanalytickou fázi pro požadovaná vyšetření. Obecné podmínky pro transport vzorků jsou shrnuty v následující tabulce:

*) nelze li zaručit dodržení teplotního intervalu během transportu, je vhodné vzorky zamrazit na < -20 ºC transportovat zamražené.